湖南韵邦生物医药有限公司
Hunan Yunbang Bio-pharmaceutical Co., Ltd.

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X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。

  X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays;

  X-Gal用于检测β-半乳糖苷酶(LacZ)的活性。由于β-半乳糖苷酶不能分泌,需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能进行显色。因此操作流程相对繁琐。

  携带MEL1基因的酵母菌株:Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A


  1、X-α-gal使用方法

  一、涂布于预制平板:

  1)溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL。

  2)涂布200μL(15cm) 或者100μL(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;

  3)置于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时);

  4) 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。


  二、直接加入琼脂中:

  1)溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL。

  2)将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃;

  3)向上述培养基中加入20mg/mLX-α-Gal,比例为每升培养基中加入1mLX-α-Gal溶液。


  2、X-gal使用方法(filter-liftassays)

  试剂准备

  •        Z buffer

  16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  5.50g/L   NaH2PO4·H2O

  0.75g/L   KCl

  0.246g/L  MgSO4·7H2O

  调节pH7.0,高温高压灭菌。可室温保存。 

  20mg/mLX-gal储液(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside),溶于DMF,保存于-20。

  

  •   Z缓冲液/X-gal溶液

  100mL     Zbuffer

  1.67mL   X-gal 储液

  0.27mL    β-mercaptoethanol


  实验流程

  1.生长2-4天的新鲜单菌落;用铅笔在滤纸上画8×8的方格,每个方格放置一个新鲜培养的单菌落并记录下编号;

  2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

  3. 在干净平皿中铺一张滤纸,用Zbuffer/X-gal反应液(2.5-5mL)将滤纸浸湿;

  4.用镊子另取一张无菌、干燥的滤纸,铺在划线培养的酵母菌表面,用镊子轻轻滚压,使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记,以便识别菌种编号);

  5.当滤纸全部湿润,用镊子将铺有菌落的滤纸放入液氮中速冻30sec,液氮需没过菌落;

  6. 取出滤纸,放置于一干净平皿中使其室温解冻;

  7.用镊子将解冻的滤纸轻轻叠放在浸有反应液的滤纸上(有菌的表面朝上),保证两层滤纸间没有气泡;30°C,培养8h,观察X-gal染色情况。菌落变为蓝色的为阳性,超过8h变蓝,很有能是假阳性。

  注意事项:

  1.x-gal注意遮光保存。

  2.液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融,这样会使细胞破碎的更加完全一些,便于染色液的渗透。


0

X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-23 08:39:34

  X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。

  X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays;

  X-Gal用于检测β-半乳糖苷酶(LacZ)的活性。由于β-半乳糖苷酶不能分泌,需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能进行显色。因此操作流程相对繁琐。

  携带MEL1基因的酵母菌株:Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A


  1、X-α-gal使用方法

  一、涂布于预制平板:

  1)溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL。

  2)涂布200μL(15cm) 或者100μL(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;

  3)置于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时);

  4) 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。


  二、直接加入琼脂中:

  1)溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL。

  2)将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃;

  3)向上述培养基中加入20mg/mLX-α-Gal,比例为每升培养基中加入1mLX-α-Gal溶液。


  2、X-gal使用方法(filter-liftassays)

  试剂准备

  •        Z buffer

  16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  5.50g/L   NaH2PO4·H2O

  0.75g/L   KCl

  0.246g/L  MgSO4·7H2O

  调节pH7.0,高温高压灭菌。可室温保存。 

  20mg/mLX-gal储液(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside),溶于DMF,保存于-20。

  

  •   Z缓冲液/X-gal溶液

  100mL     Zbuffer

  1.67mL   X-gal 储液

  0.27mL    β-mercaptoethanol


  实验流程

  1.生长2-4天的新鲜单菌落;用铅笔在滤纸上画8×8的方格,每个方格放置一个新鲜培养的单菌落并记录下编号;

  2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

  3. 在干净平皿中铺一张滤纸,用Zbuffer/X-gal反应液(2.5-5mL)将滤纸浸湿;

  4.用镊子另取一张无菌、干燥的滤纸,铺在划线培养的酵母菌表面,用镊子轻轻滚压,使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记,以便识别菌种编号);

  5.当滤纸全部湿润,用镊子将铺有菌落的滤纸放入液氮中速冻30sec,液氮需没过菌落;

  6. 取出滤纸,放置于一干净平皿中使其室温解冻;

  7.用镊子将解冻的滤纸轻轻叠放在浸有反应液的滤纸上(有菌的表面朝上),保证两层滤纸间没有气泡;30°C,培养8h,观察X-gal染色情况。菌落变为蓝色的为阳性,超过8h变蓝,很有能是假阳性。

  注意事项:

  1.x-gal注意遮光保存。

  2.液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融,这样会使细胞破碎的更加完全一些,便于染色液的渗透。


X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-23 08:39:34

  X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。

  X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays;

  X-Gal用于检测β-半乳糖苷酶(LacZ)的活性。由于β-半乳糖苷酶不能分泌,需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能进行显色。因此操作流程相对繁琐。

  携带MEL1基因的酵母菌株:Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A


  1、X-α-gal使用方法

  一、涂布于预制平板:

  1)溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL。

  2)涂布200μL(15cm) 或者100μL(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;

  3)置于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时);

  4) 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。


  二、直接加入琼脂中:

  1)溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL。

  2)将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃;

  3)向上述培养基中加入20mg/mLX-α-Gal,比例为每升培养基中加入1mLX-α-Gal溶液。


  2、X-gal使用方法(filter-liftassays)

  试剂准备

  •        Z buffer

  16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  5.50g/L   NaH2PO4·H2O

  0.75g/L   KCl

  0.246g/L  MgSO4·7H2O

  调节pH7.0,高温高压灭菌。可室温保存。 

  20mg/mLX-gal储液(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside),溶于DMF,保存于-20。

  

  •   Z缓冲液/X-gal溶液

  100mL     Zbuffer

  1.67mL   X-gal 储液

  0.27mL    β-mercaptoethanol


  实验流程

  1.生长2-4天的新鲜单菌落;用铅笔在滤纸上画8×8的方格,每个方格放置一个新鲜培养的单菌落并记录下编号;

  2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

  3. 在干净平皿中铺一张滤纸,用Zbuffer/X-gal反应液(2.5-5mL)将滤纸浸湿;

  4.用镊子另取一张无菌、干燥的滤纸,铺在划线培养的酵母菌表面,用镊子轻轻滚压,使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记,以便识别菌种编号);

  5.当滤纸全部湿润,用镊子将铺有菌落的滤纸放入液氮中速冻30sec,液氮需没过菌落;

  6. 取出滤纸,放置于一干净平皿中使其室温解冻;

  7.用镊子将解冻的滤纸轻轻叠放在浸有反应液的滤纸上(有菌的表面朝上),保证两层滤纸间没有气泡;30°C,培养8h,观察X-gal染色情况。菌落变为蓝色的为阳性,超过8h变蓝,很有能是假阳性。

  注意事项:

  1.x-gal注意遮光保存。

  2.液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融,这样会使细胞破碎的更加完全一些,便于染色液的渗透。


X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-23 08:39:34

  X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。

  X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays;

  X-Gal用于检测β-半乳糖苷酶(LacZ)的活性。由于β-半乳糖苷酶不能分泌,需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能进行显色。因此操作流程相对繁琐。

  携带MEL1基因的酵母菌株:Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A


  1、X-α-gal使用方法

  一、涂布于预制平板:

  1)溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL。

  2)涂布200μL(15cm) 或者100μL(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;

  3)置于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时);

  4) 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。


  二、直接加入琼脂中:

  1)溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL。

  2)将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃;

  3)向上述培养基中加入20mg/mLX-α-Gal,比例为每升培养基中加入1mLX-α-Gal溶液。


  2、X-gal使用方法(filter-liftassays)

  试剂准备

  •        Z buffer

  16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  5.50g/L   NaH2PO4·H2O

  0.75g/L   KCl

  0.246g/L  MgSO4·7H2O

  调节pH7.0,高温高压灭菌。可室温保存。 

  20mg/mLX-gal储液(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside),溶于DMF,保存于-20。

  

  •   Z缓冲液/X-gal溶液

  100mL     Zbuffer

  1.67mL   X-gal 储液

  0.27mL    β-mercaptoethanol


  实验流程

  1.生长2-4天的新鲜单菌落;用铅笔在滤纸上画8×8的方格,每个方格放置一个新鲜培养的单菌落并记录下编号;

  2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

  3. 在干净平皿中铺一张滤纸,用Zbuffer/X-gal反应液(2.5-5mL)将滤纸浸湿;

  4.用镊子另取一张无菌、干燥的滤纸,铺在划线培养的酵母菌表面,用镊子轻轻滚压,使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记,以便识别菌种编号);

  5.当滤纸全部湿润,用镊子将铺有菌落的滤纸放入液氮中速冻30sec,液氮需没过菌落;

  6. 取出滤纸,放置于一干净平皿中使其室温解冻;

  7.用镊子将解冻的滤纸轻轻叠放在浸有反应液的滤纸上(有菌的表面朝上),保证两层滤纸间没有气泡;30°C,培养8h,观察X-gal染色情况。菌落变为蓝色的为阳性,超过8h变蓝,很有能是假阳性。

  注意事项:

  1.x-gal注意遮光保存。

  2.液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融,这样会使细胞破碎的更加完全一些,便于染色液的渗透。


X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-23 08:39:34

  X-Gal与X-α-gal有什么不同?二者可以互相替换吗?

  X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。

  X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays;

  X-Gal用于检测β-半乳糖苷酶(LacZ)的活性。由于β-半乳糖苷酶不能分泌,需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能进行显色。因此操作流程相对繁琐。

  携带MEL1基因的酵母菌株:Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A


  1、X-α-gal使用方法

  一、涂布于预制平板:

  1)溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL。

  2)涂布200μL(15cm) 或者100μL(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;

  3)置于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时);

  4) 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。


  二、直接加入琼脂中:

  1)溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL。

  2)将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃;

  3)向上述培养基中加入20mg/mLX-α-Gal,比例为每升培养基中加入1mLX-α-Gal溶液。


  2、X-gal使用方法(filter-liftassays)

  试剂准备

  •        Z buffer

  16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  5.50g/L   NaH2PO4·H2O

  0.75g/L   KCl

  0.246g/L  MgSO4·7H2O

  调节pH7.0,高温高压灭菌。可室温保存。 

  20mg/mLX-gal储液(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside),溶于DMF,保存于-20。

  

  •   Z缓冲液/X-gal溶液

  100mL     Zbuffer

  1.67mL   X-gal 储液

  0.27mL    β-mercaptoethanol


  实验流程

  1.生长2-4天的新鲜单菌落;用铅笔在滤纸上画8×8的方格,每个方格放置一个新鲜培养的单菌落并记录下编号;

  2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

  3. 在干净平皿中铺一张滤纸,用Zbuffer/X-gal反应液(2.5-5mL)将滤纸浸湿;

  4.用镊子另取一张无菌、干燥的滤纸,铺在划线培养的酵母菌表面,用镊子轻轻滚压,使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记,以便识别菌种编号);

  5.当滤纸全部湿润,用镊子将铺有菌落的滤纸放入液氮中速冻30sec,液氮需没过菌落;

  6. 取出滤纸,放置于一干净平皿中使其室温解冻;

  7.用镊子将解冻的滤纸轻轻叠放在浸有反应液的滤纸上(有菌的表面朝上),保证两层滤纸间没有气泡;30°C,培养8h,观察X-gal染色情况。菌落变为蓝色的为阳性,超过8h变蓝,很有能是假阳性。

  注意事项:

  1.x-gal注意遮光保存。

  2.液氮冰冻菌的时候可以试试反复冻融,这样会使细胞破碎的更加完全一些,便于染色液的渗透。


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